精品流式抗体

流式细胞抗体

流式细胞术是一种常用的基于激光的技术,在单细胞悬液中能够对细胞进行计数、分类并鉴定表型。Bio-Techne旗下R&D Systems以及Novus两个子品牌提供抗体以及辅助试剂和工具,以简化您的流式细胞术实验。

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R&D SystemsNovus挑选所有流式细胞术验证的一抗。探索我们广泛的荧光偶联抗体选择,包括AlexaFluor®488, Alexa Fluor®647, PE, PE-Cy7™! 查找您需要的流式抗体

1.1 Flow Cytometry Kits:

流式鉴定试剂盒

试剂盒内主要产品

货号

H/M Pluripotent Stem Cells

(/鼠多能干细胞)

SOX2-PE Mouse IgG2A; Clone 245610

FMC001

Oct-3/4-APC Rat IgG2B; Clone 240408

SSEA-4-CFS Mouse IgG3; Clone MC-813-70

SSEA-1-PerCP Mouse IgM; Clone MC-480

Hematopoietic Stem Cells

(人造血干细胞)

CD34-APC Mouse IgG1; Clone QBEnd10

FMC019

SCF R/CD117-PE Mouse IgG1; Clone 47233

CD38-PerCP Mouse IgG2A; Clone 240742

CD11b-CFS Mouse IgG2B; Clone 238446

Mesenchymal Stem Cells (ISTC)

(人间充质干细胞)

CD90-APC Mouse IgG2A; Clone Thy-1A1

FMC020

CD73-CFS Mouse IgG2B; Clone 606112

CD105-PerCP Mouse IgG1; Clone 166707

Negative Marker Cocktail:

• CD45-PE Mouse IgG1; Clone 2D1

• CD34-PE Mouse IgG1; Clone QBEnd10

• CD11b-PE Mouse IgG2B; Clone 238446

• CD79A-PE Mouse IgG1; Clone 706931

• HLA-DR-PE Mouse IgG1; Clone L203

Mesenchymal Stem Cells

(人间充质干细胞)

CD105/Endoglin-PerCP Mouse IgG1; Clone 166707

FMC002

CD146/MCAM-CFS Mouse IgG1; Clone 128018

CD90/Thy1-APC Mouse IgG2A; Clone Thy-1A1

CD45-PE Mouse IgG1; Clone 2D1

Mesenchymal Stem Cells

(小鼠间充质干细胞)

CD105/Endoglin-CFS Rat IgG2A; Clone 209701

FMC003

CD29/Integrin β1-PE Rat IgG2A; Clone 265917

Sca-1-APC Rat IgG2A; Clone 177228

CD45-PerCP Rat IgG2B; Clone 30-F11

Rat Regulatory T cells

(大鼠Treg

FoxP3 Alexa Fluor® 647 Mouse IgG1 (Clone 376209)

FMC015B

CD25/IL-2 Rα-PE Mouse IgG1(Clone 745520)

CD4-Fluorescein Mouse IgG2A (Clone OX-38)

Mouse Regulatory T cells

(小鼠Treg

Human/Mouse FoxP3-PE Rabbit IgG; Clone 1054C

FMC022

Mouse CD4-FITC Rat IgG2B; Clone GK1.5

Mouse IL-2 Rα/CD25-APC Rat IgG2A; Clone 280406

Human Regulatory T cells

(人Treg

Human/Mouse FoxP3-PE Rabbit IgG; Clone 1054C

FMC021

Human CD4-FITC Mouse IgG2A; Clone 11830

Human IL-2 Rα/CD25-APC Mouse IgG2A; Clone 24212

Mouse Th1 Cells

CD4-PE Rat IgG2B; Clone GK1.5

FMC010

IL-12 Rβ2-APC Mouse IgG1; Clone 305719

IFN-γ-CFS Rat IgG2A; Clone 37895

T-bet-PerCP Mouse IgG1; Clone 525803

Human Th1 Cells

CD4 Alexa Fluor® 700 Mouse IgG2A (Clone 11830)

FMC009B

TIM-3 Alexa Fluor® 594 Rat IgG2A (Clone 344823)

IL-12 Rβ2-PE Mouse IgG1 (Clone 305719)

IFN-γ-PerCP Mouse IgG2B (Clone 25723)

T-bet Alexa Fluor® 488 Mouse IgG1 (Clone 525831)

Mouse Th2 Cells

STAT6-APC, Mouse IgG2A; Clone 253906

FMC012

IL-5-PE, Rat IgG1; Clone TRFK5

IL-4 R-CFS, Goat IgG; Antibody-Purified Polyclonal Antibody

CD4-PerCP, Rat IgG2B; Clone GK1.5

Human Th2 Cells

CD4 Alexa Fluor® 700 Mouse IgG2A (Clone 11830)

FMC011B

IL-10 Alexa Fluor® 488 Rabbit IgG (Clone 2050B)

CCR3-PE Rat IgG2A (Clone 61828)

GATA-3 Alexa Fluor® 594 Mouse IgG2B (Clone 634919)

Phospho-STAT6 Alexa Fluor® 647 Rabbit IgG (Clone 1248D)

Human Th17 Cells

CD4 Alexa Fluor® 594 Mouse IgG2A (Clone 11830)

FMC007B

IL-17A Alexa Fluor® 700 Mouse IgG2B (Clone 41809)

RORα-PE Mouse IgG2B (Clone 784652)

RORγt Alexa Fluor® 488 Rabbit IgG (Clone 1181A)

CXCR6 APC Mouse IgG2B (Clone 56811)

Human Myeloid Dendritic Cell

(人髓样DC

BDCA-3/CD141-PE Mouse IgG1 (Clone 501733)

FMC016

BDCA-1/CD1c-APC Goat IgG

CD11c-CFS Mouse IgG1 (Clone ICRF 3.9)

CD16/Fcγ RIII-PerCP Mouse IgG2A (Clone 245536)

 NK Cell Killing Assay

hCD3ε Alexa Fluor® 405 antibody

FMC032

hLAMP-1/CD107a PE antibody

mIgG2b PE antibody

hCD56 Alexa Fluor® 700 antibody

Mito Mark Target Cell DyeFITC

Janelia Fluor® NK Cell DyeAPC

Viability Staining DyeAmCyan

Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

 

4830-250-K
FlowTACS Flow Cytometry Apoptosis Detection Kit   4817-60-K

 

 

1.2 Flow Cytometry Panel:

流式鉴定组合Panel

Marker

克隆

荧光

货号

NK Cell Phenotype

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor® 405

FAB100V

NCAM1/CD56

2524C

Alexa Fluor® 647

FAB24086R

NKp30/NCR3

210845*

Alexa Fluor® 488

FAB1849G

NKG2D/CD314

149810*

Alexa Fluor® 700

FAB139N

NKp46/NCR1

195314*

PE

FAB1850P

Fc Gamma R III (CD16)

245536

PerCP

FAB2546C

Intracellular NK Cell Activation Panel

FMC-P-005

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor® 405

FAB100V

NCAM1/CD56

2524C

Alexa Fluor® 647

FAB24086R

Granzyme B

351927

Alexa Fluor® 488

IC2906G

Granzyme K

2471A

Alexa Fluor® 594

IC10216T

Perforin-1

1031751

Alexa Fluor® 750

IC103853S

Fc Gamma R III (CD16)

245536

PerCP

FAB2546C

Regulatory T Cells (Tregs) Panel

FMC-P-004

CD3*

UCHT1

Alexa Fluor® 405

FAB100V

CD4

11830

PerCP

FAB3791C

CD25/IL-2Rα

24212

PE

FAB1020A

CD127/IL-7R

40131

Alexa Fluor® 700

FAB306N

GITR/TNFRSF18

110416

FITC

FAB689F

FoxP3

376209

Alexa Fluor® 647

IC8970P

Monocyte and Dendritic Cell Subsets Panel

FMC-P-008

HLA-DR

L203

Alexa Fluor®405

FAB4869V

CD86

37301

FITC

FAB141F

CD11c

ICRF 3.9

PE

FAB1777P

CD123

32703

PerCP

FAB301C

CD16

245536

APC

FAB2546A

CD20

396444

Alexa Fluor®700

FAB4225N

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor®700

FAB100N

CD56

2524C

Alexa Fluor®700

FAB24086N

CD14

134620

Alexa Fluor®750

FAB3832S

M1 Macrophage Polarization Panel

FMC-P-006

CD38

240742

APC

FAB2404A

CD11c

ICRF 3.9

PE

FAB1777P

HLA-DR

L203

PerCP

FAB4869C

CD86

37301

FITC

FAB141F

NCAM1/CD56

2524C

Alexa Fluor®700

FAB24086N

CD20

396444

Alexa Fluor®405

FAB4225V

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor®405

FAB100V

M2 Macrophage Polarization Panel

FMC-P-007

VEGF

23410

APC

IC2931A

SR-AI/MSR/CD204

351615

PE

FAB2708P

CD163

215927

PerCP

FAB1607C

MMR/CD206

685641

Alexa Fluor®488

FAB25342G

NCAM-1/CD56

2524C

Alexa Fluor®700

FAB24086N

CD20

396444

Alexa Fluor®405

FAB4225V

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor®405

FAB100V

Human CD19 B Cell Panel

FMC-P-003

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor® 405

FAB100V

CD19

4G7-2E3

PE

FAB4867P

CD45

2D1

Alexa Fluor® 647

FAB1430R

TBNK Cell Panel

FMC-P-001

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor® 405

FAB100V

CD4

11830

FITC

FAB3791F

CD8

37006

APC

FAB1509A

CD19

4G7-2E3

PE

FAB4867P

CD56

2524C

Alexa Fluor® 700

FAB24086N

TBMNK Cell Panel

FMC-P-002

CD3

UCHT1*

Alexa Fluor® 405

FAB100V

CD4

11830

FITC

FAB3791F

CD8

37006

APC

FAB1509A

CD19

4G7-2E3

PE

FAB4867P

CD56

2524C

Alexa Fluor® 700

FAB24086N

CD16

245536

PerCP

FAB2546C

CD14

134620

Alexa Fluor® 750

FAB3832S

*标记的克隆经过 HLDA的独立验证.

 

 

1.3 流式辅助试剂

Flow Cytometry Staining Buffer (1X)

Flow Cytometry Fixation Buffer (1X)

Flow Cytometry Fixation & Permeabilization Buffer Kit I

Flow Cytometry Human Lyse Buffer (10X)

Flow Cytometry Permeabilization/Wash Buffer I (1X)

Fluorochrome-conjugated Streptavidin

Flow Cytometry Mouse Lyse Buffer (10X)

Flow Cytometry Fixation/Permeabilization Buffer I (1X)

Avidin-Fluorescein

 

 

1.4 特色流式检测产品:

 

质谱流式抗体

质谱流式细胞术是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。传统的流式技术主要基于对荧光染料的检测,当多种荧光染料一起检测时,由于荧光基团发射光谱较宽,容易发生重叠,限制了检测通道数量(<20个);同时,它会带来严重的串色问题,很多通道的信号需要复杂的补偿计算,降低检测分辨率。

查询CyTOF-ready抗体
 

Fluorokines™荧光标记靶点蛋白

探索R&D Systems广泛的Fluorokines产品的,用于检测嵌合抗原受体(CARs),免疫检查点受体或SARS – CoV-2结合细胞。Fluorokines具有高度特异性,可通过流式细胞术直接对靶分子进行染色和检测。


进一步了解

1.5 其他流式产品:

Bio-Techne还拥有同型对照染色试剂盒和缓冲液荧光染料细胞凋亡试剂盒、用于流式的一抗二抗,以及 MitoBrilliant™ 新一代荧光染料,用于活细胞和固定细胞中线粒体的定位和标记,与流式细胞术兼容。除此之外,我们提供专用于校准、补偿和细胞计数的磁珠,使用磁珠质控品和标准品有助于确保您的仪器正常运行,并确保您的数据具有可重现性和可靠性。

 

2.   流式细胞抗体配色

Bio-Techne多选择的偶联荧光染料和标记:

激发光(nm)

偶联标记物

最大激发光(nm)

最大发射光(nm)

发射光颜色

亮度

 

 

Biotin

 

 

 

 

 

 

HRP

 

 

 

 

UV (350)   

    

Alexa Fluor® 350

346

442

    

中等

UV (350)   

    

DyLight 350

353

432

    

中等

Violet (405)

    

DyLight 405

400

420

    

中等

Violet (405)   

    

Alexa Fluor® 405

401

421

    

中等

Violet (405)   

 

mFluorTM Violet 450

406

445

New!

 

Violet (405)   

 

mFluorTM Violet 500

410

501

New!

 

Violet (405)   

 

mFluorTM Violet 610

421

613

New!

 

Blue (488)   

    

Alexa Fluor® 488

490

525

    

中等

Blue (488)   

    

DyLight 488

493

518

    

中等

Blue (488)   

    

FITC

498

519

    

中等

Blue (488)   

Y-G (561)   

PE

498, 565

578

    

明亮

Blue (488)   

Y-G (561)   

PE/Atto594

498,566

632

    

明亮

Blue (488)   

    

PerCP

482

678

    

暗淡

Blue (488)   

Y-G (561)   

PE/Cy5.5

498, 566

700

    

中等

Blue (488)   

Y-G (561)   

PE/Cy7

489, 566

782

    

中等

Y-G (561)   

    

Alexa Fluor® 532

532

554

    

中等

Y-G (561)   

    

Janelia Fluor® 549

549

571

    

明亮

Y-G (561)   

    

DyLight 550

562

576

    

明亮

Y-G (561)   

    

Alexa Fluor® 594

590

617

    

中等

Y-G (561)   

    

DyLight 594

593

618

    

中等

Red (633,640)   

    

APC

650

660

    

明亮

Red (633,640)   

    

Janelia Fluor® 646

646

664

    

中等

Red (633,640)   

    

DyLight 650

652

672

    

明亮

Red (633,640)   

    

Alexa Fluor® 647

653

669

    

中等

Red (633,640)   

    

DyLight 680

692

712

    

明亮

Red (633,640)   

    

Alexa Fluor® 700

696

720

    

暗淡

Red (633,640)   

    

Alexa Fluor® 750

749

775

    

中等

Red (633,640)   

    

APC/Cy7

652

790

    

中等

Red (633,640)

 

DyLight 755 755 776   中等

Key: 'Y-G'= Yellow-Green

 

 

1)       仪器配置:在配色之前需要了解仪器的型号配置。(激光器、滤光片通道)

*最大程度地减少荧光溢出和补偿问题。多色检测时充分利用仪器允许的全部荧光染料,尽量选用多激光激发。例如,考虑使用与 AlexaFluor 405Ex max=401 nm/Em max=421 nm)偶联的抗体以及与 AlexaFluor 647Ex max=650 nm/Em max=665 nm)偶联的抗体。

2)       根据抗原的表达量选择合适的荧光偶联抗体,使染料的亮度与抗原密度相匹配。

*一般原则是高表达抗原与弱荧光染料配对,亮荧光染料与低表达抗原配对(强配弱,弱配强)。

*如果检测生物样品中浓度未知的抗原或重要分子,则优先挑选强荧光染料。

*(荧光染料相对亮度表) 根据文献查看抗原表达强弱,亮度大小参考染色指数。

*荧光染料的被检测到的强度除了与其本身性质有关,还因仪器的激发光波长、检测器范围和分辨率有所不同。

3)       注意光谱溢漏的影响,尽量避免复合染料带来的假阳性。

*当两种分子共表达于同一细胞,强表达抗原选择对其他通道影响小的荧光染料,弱表达抗原选择受影响小的通道。如405 nm的第一通道、488nmFITC通道、637nmAPC通道。

*尽量减少上级细胞对下级细胞的干扰。如CD3阳性细胞是CD4阳性细胞的上级细胞,CD3可以受到CD4的荧光信号干扰,而CD4标记相反。可以通过光谱查看器来了解每个通道内每种染料的光谱重叠。

 

 

光谱查看器比较AlexaFluor405AlexaFluor647的光谱范围,可发现没有重叠。

*除了同一激光器下的染料重叠之外,还需注意不同激光器下的荧光重叠,例如复合染料 PE-Cy5 标记的抗体与 APC 标记的抗体搭配使用,此搭配需较大幅度地调节两者的颜色补偿。因为 Cy5 的激发波长与 APC 的激发波长相近,所以 PE-Cy5 荧光素中的 Cy5,也会被激发 APC 的第二个激光器(氦氖激光器)所激发。

 

 

4)       尽量用红色荧光激发自发荧光高的样本。

5)       正式使用前,需提前测试和调试相关参数。

 

3.   流式实验方案

§   细胞表面标记物的流式细胞术方案

§   细胞内染色流式细胞术方案(酒精)

§   细胞内染色流式细胞术方案(去垢剂)

§   碘化丙啶细胞活力流式细胞术方案

 

 

 

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